Estudante: Raiana dos Anjos Moraes
Orientação: Darízy Flávia Silva Amorim de Vasconcelos
Título da Tese: “NONO2P INDUZ VASORRELAXAMENTO EM ARTÉRIA CORONÁRIA E MESENTÉRICA, INOTROPISMO NEGATIVO E HIPOTENSÃO: UM DOADOR DE ÓXIDO NÍTRICO PROMISSOR PARA O TRATAMENTO DE DOENÇAS CARDIOVASCULARES”
Programa: Pós-Graduação em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa
Data de defesa: 22/09/2023
Horário: 09h00
Local: Sala Virtual do Zoom
ID da reunião: 864 7291 8539
Senha de acesso: raiana

Resumo

Introdução: As doenças cardiovasculares são as principais causas de morte no mundo. O dano ao endotélio reduz a síntese e/ou biodisponibilidade de óxido nítrico (NO), que tem um papel na hipertensão, infarto do miocárdio e aterosclerose. O NO está envolvido em várias funções, como a manutenção da homeostase vascular e cardíaca. Os doadores de NO são vasodilatadores potentes, mas podem apresentar toxicidade e/ou tolerância vascular. Dessa forma, na tentativa de produzir uma nova alternativa terapêutica, na forma de fármaco da classe dos doadores de NO, o NONO2P foi sintetizado, e ainda não há relatos na literatura sobre a atividade cardiovascular. O objetivo deste estudo foi investigar as atividades cardiovasculares do NONO2P, bem como descrever os mecanismos de ação envolvidos nas respostas relaxantes observadas na artéria mesentérica superior. Métodos: Ratos Wistar (13-18 semanas) foram eutanasiados e a artéria mesentérica superior e coronária foram isoladas para registro da tensão isométrica em banho de órgãos ou miógrafo, respectivamente. Adicionalmente, em átrios isolados foram avaliados a frequência e a força de contração cardíaca. Ratos Wistar e espontaneamente hipertensos (SHR) foram usados em experimentos in vivo para avaliar a pressão arterial e a frequência cardíaca. Células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC) foram usadas para avaliar a citotoxicidade do NONO2P usando o ensaio de alamar blue. Células endoteliais de camundongos foram usadas para avaliar espécies reativas de oxigênio intracelular (ROS) e níveis de NO após tratamento com NONO2P usando intensidade de fluorescência (FI) com o corante fluorescente, DHE ou DAF, respectivamente. Este projeto foi aprovado pela Comissão de Ética no Uso de Animais da Universidade Federal da Bahia (CEUA/UFBA nº 4169290420). Resultados: Em células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC), o NONO2P não foi tóxico nas concentrações testadas (6,25, 12,5, 25 ou 50 µM). NONO2P aumentou consideravelmente a concentração de NO nas células endoteliais de camundongos. A administração cumulativa de NONO2P (0.1 ρM to 3µM) em anéis de artéria mesentérica pré-contraídos com fenilefrina, 1 μM, induziu vasorrelaxamento independente do endotélio. O sequestrador de radicais livres de óxido nítrico (NO• ) (PTIO; 100 μM e hidroxocobalamina; 30 μM) e o sequestrador de ânions nitroxil (NO− ) (L-cisteína; 3 mM) diminuíram os relaxamentos promovidos por NONO2P. Além disso, a presença do inibidor específico da guanilato ciclase solúvel, ODQ (10 µM), quase aboliu o efeito vasorrelaxante induzido por NONO2P. KT5823 (inibidor seletivo de PKG; 1 μM) atenuou o efeito relaxante induzido por NONO2P em comparação com a resposta controle. Adicionalmente, NONO2P induziu vasorrelaxamento em anéis expostos a solução de Tyrode despolarizante contendo KCl 60 mM ou KCl 20 mM, que foi atenuado em relação ao controle, sugerindo a participação de canais para K+ . A resposta vasorrelaxante induzida por NONO2P foi significativamente atenuada na presença de BaCl2 (30 μM), um bloqueador de canais para potássio retificadores de entrada (Kir), na presença de 4-AP (1 mM), um bloqueador de canais para potássio dependentes de voltagem (Kv) e na presença de iberiotoxina (50 nM), um bloqueador de canais para potássio sensíveis a Ca2+ de grande condutância (BKCa). O relaxamento induzido por NONO2P foi atenuado pelo ácido ciclopiazônico (10 µM), indicando que a ativação da SERCA está envolvida nesse relaxamento. Interessantemente, o NONO2P exibiu um efeito vasorrelaxante em diferentes vasos sanguíneos (artérias mesentéricas e coronárias). No entanto, a exposição ao NONO2P por 30 e 60 minutos induziu tolerância a esse doador de NO em anéis mesentéricos, assim como o NONO2P estimulou a produção de ROS nas células endoteliais. A administração aguda de NONO2P induziu hipotensão em animais normotensos e hipertensos não anestesiados. Além disso, NONO2P causou um efeito inotrópico negativo sem alterar a ritmicidade cardíaca. Conclusão: Esta é a primeira evidência do efeito vasorrelaxante induzido pelo NONO2P na artéria coronária e mesentérica. Interessantemente, o NONO2P pode liberar diferentes tipos de NO, radicais livres de NO (NO• ) ou espécies de ânions nitroxil (NO− ). O efeito vasorrelaxante independente do endotélio induzido por NONO2P envolve a ativação da guanilato ciclase solúvel, PKG, ativação de canais de K+ e SERCA. Além disso, NONO2P pode reduzir a força de contração cardíaca. Por outro lado, a pré-exposição ao NONO2P pode promover o desenvolvimento de tolerância vascular. Esta é a primeira evidência dos efeitos da hipotensão induzida por este doador, tornando-se uma molécula promissora como uma nova alternativa terapêutica possível para o tratamento de doenças cardiovasculares, como hipertensão e angina.

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