Estudante: Girlaine Café Santos
Orientação: Milena Botelho Pereira Soares
Título da tese: Avaliação do potencial pró angiogênico/arteriogênico de células-tronco/estromais mesenquimais humanas geneticamente modificadas para superexpressar o fator inibidor da leucemia em modelo de isquemia crítica de membros
Programa: Pós-Graduação em Patologia Humana e Experimental
Data de defesa: 30/01/2025
Horário: 14h00
Local: Sala Virtual do Zoom
ID da reunião: 854 9013 8546
Senha: defesa

Resumo

INTRODUÇÃO: A doença arterial periférica (DAP) é uma afecção vascular crônica cujo desfecho mais extremo, a isquemia crítica de membros inferiores (ICM), é umas das principais causas de morbimortalidade mundial. Apesar da alta prevalência, a DAP segue sem tratamento eficaz para recuperação da vasculatura perdida. As células-tronco/estromais mesenquimais (MSC) são células com capacidade de secreção de moléculas mediadoras de efeitos biológicos como angiogênese e arteriogênese, representando uma opção terapêutica contra a ICM. O potencial terapêutico de MSC pode ser incrementado através da superexpressão de fatores de interesse, via modificação genética. O fator inibidor da leucemia (LIF) foi descrito como uma citocina capaz de aumentar o potencial pró-angiogênico quando superexpresso em MSC. OBJETIVOS: Gerar uma linhagem de MSC humanas superexpressando LIF (MSC_LIF) e avaliar o seu potencial pró-angiogênico/arteriogênico em modelos in vitro e in vivo. MÉTODOS: As MSC foram isoladas de cordão umbilical e transduzidas através de vetores lentivirais de segunda geração expressando o gene LIF. A eficiência da transdução e produção da proteína LIF foram confirmadas por RT-qPCR e ELISA, respectivamente. A caracterização das células geradas foi realizada por diferenciação nas três linhagens mesodérmicas e imunofenotipagem. A duplicação celular foi avaliada por Population Doubling e ensaio de UFC-F. A análise da expressão gênica dos principais marcadores de angiogênese, células perivasculares e arteriogênese foi realizada por RT-qPCR. O potencial de formação de microvasos in vitro foi investigado pelo ensaio de brotamento de anéis aórticos. O ensaio do plug de Matrigel® investigou o potencial de recrutamento e migração da vasculatura in vivo. O modelo de isquemia crítica de membros posteriores avaliou o potencial de MSC_LIF na formação de vasos arteriais colaterais e proteção tecidual contra isquemia in vivo. RESULTADOS: MSC_LIF apresentou um aumento de expressão e secreção de LIF em relação às células não transduzidas, indicando o sucesso da modificação genética. A imonofenotipagem e o ensaio de diferenciação mesodérmica mostraram que a MSC_LIF manteve o fenótipo e a multipotência característicos de MSC. Os ensaios de UFC-F e PD demonstraram aumento da duplicação celular em MSC_LIF. A análise de expressão gênica demonstrou regulação positiva de genes essenciais para a angiogênese, arteriogênese e para marcadores perivasculares. O ensaio de brotamento de anéis aórticos mostrou que MSC_LIF promoveu um maior surgimento de brotamentos de microvasos a partir do tecido arterial. O ensaio do plug de Matrigel® revelou que MSC_LIF foi mais eficaz em induzir migração de vasos sanguíneos CD31+ e arteríolas aSMA+ para o interior dos plugs. O tratamento com MSC_LIF restaurou o fluxo sanguíneo pela formação de arteríolas aSMA+, melhorou o escore isquêmico e o desempenho funcional, além de promover maior proteção tecidual contra isquemia no modelo de isquemia crítica de membros. CONCLUSÃO: A superexpressão de LIF é uma estratégia promissora para aumentar o potencial angiogênico/arteriogênico e de reparação tecidual de MSC para o tratamento da CLI. PALAVRAS-CHAVE: Doença arterial periférica, Células- tronco/estromais mesenquimais, LIF, Angiogênese, Arteriogênese, Isquemia crítica de membros inferiores.

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