Autoria: Sara Nunes de Oliveira Araújo
Orientação: Natalia Machado Tavares
Título da tese: O papel funcional do miR-193b e miR-205 na exposição in vitro de diferentes células humanas à Leishmania braziliensis
Programa: Pós-Graduação em Patologia Humana e Experimental
Data de defesa: 28/01/2022
Horário: 09h00
Local: Sala virtual do Zoom

RESUMO

As leishmanioses estão entre as enfermidades mais negligenciadas no mundo, afetando as populações mais pobres, principalmente em países em desenvolvimento. A leishmaniose cutânea (LC) é a forma mais frequente dessa doença, caracterizada por lesão(s) cutânea(s) ulceradas(s) com uma inflamação crônica descontrolada. Os mecanismos moleculares associados a regulações pós-transcricionais e a imunopatogênese da LC permanecem pouco compreendidos. Os microRNAs (miRNAs), pequenos RNAs endógenos não codificantes, surgiram nos últimos anos como moléculas-chave na regulação da expressão gênica. Dados do nosso grupo mostraram que o miR-193b, miR-671 e seus alvos estão fortemente correlacionados com o tempo de cura dos pacientes com LC. Estes achados sugerem que este eixo pode desempenhar um papel importante na LC, além de serem candidatos potenciais para o desenvolvimento de novas ferramentas para a doença. Além disso, comparamos o perfil de expressão de miRNAs com outras doenças inflamatórias de pele, onde apenas o miR-205 foi
encontrado com a expressão significativamente inibida em todas as doenças. Diante dessas evidências, este estudo avaliou o papel funcional dos miR-193b e miR-205 na exposição in vitro de diferentes células humanas à Leishmania braziliensis (Lb). No primeiro capítulo, investigamos o perfil de expressão do miR-193b na infecção por Lb em macrófagos humanos in vitro. Inicialmente, análises de predição in silico sugeriram que esse miRNA tem o TREM1, TLR4, TNFRSF1B, CCR7, CD40 e STAT5 como alvos potenciais. Também foi possível validar a expressão desses alvos em novas biópsias de pacientes com LC e apenas a STAT5 não apresentou diferença estatística. Posteriormente, os ensaios com macrófagos infectados por Lb mostraram que a exposição por 30 minutos ou 4 horas reduz significativamente a expressão do miR-193b. Em contrapartida, a expressão do TREM1 foi significativamente aumentada nos dois tempos de infecção, diferente dos demais alvos que não apresentaram uma diferença estatística no perfil de expressão. Com o intuito de avaliar o papel funcional desse miRNA, macrófagos foram transfectados com miR-193b e infectados por Lb por 4 e 12 horas. Não foram observadas alterações nos potenciais alvos ou mediadores inflamatórios. No entanto, após 12 horas, houve redução na taxa de infecção e carga parasitária, sugerindo que este miRNA tem papel no controle da infecção. No segundo capítulo, validamos o perfil de expressão do miR205 em novas biópsias de pacientes com LC. Análises in silico mostraram os alvos do miR205, tanto na LC quanto nas demais doenças, e os resultados indicam que há uma especificidade dos alvos para cada doença avaliada. Sendo assim, validamos os dois genes alvo mais modulados na LC: SULF1 e o IRF1. Ambos, significativamente aumentados nas biópsias, confirmando os resultados das análises. Considerando que os queratinócitos desempenham um papel fundamental na regulação da inflamação da pele, avaliamos a expressão desse miRNA em queratinócitos humanos imortalizados (HaCats) expostos a Lb por 4 ou 24 horas, diante de lesões mecânicas. Os dados sugerem que, independente das lesões, a exposição das HaCats à Lb reduz a expressão desse miRNA. Nas HaCats transfectadas com o miRNA e expostas a Lb não foram observadas alterações na expressão dos alvos preditos, mediadores inflamatórios ou proliferação celular. No entanto, o miR-205 regulou a migração dessas células, uma vez que o percentual de fechamento de lesão no ensaio in vitro foi maior nos grupos transfectados com esse miRNA e menor com a exposição a Lb. Esses dados mostraram que a regulação negativa do miR-205 pode ser um fenômeno comum em doenças inflamatórias de pele, independente da sua etiologia, podendo atuar em processos básicos da biologia da pele e influenciando a cicatrização. Sendo assim, o miR-205 pode ser considerado um candidato promissor para aplicação na prática clínica. Em conjunto, essas análises demonstram o potencial desses dois miRNAs na LC, podendo atuar desde processos iniciais da inflamação até o processo de cicatrização da lesão.

Palavras-chave: Leishmania braziliensis, microRNA, macrófagos, queratinócitos

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