AUTORIA: Tais Soares Sena
ORIENTAÇÃO: Washington Luis Conrado dos Santos
TÍTULO DA DISSERTAÇÃO: “ASPECTOS CLINICOS E LABORATORIAIS ASSOCIADOS AO ÓBITO NA LEISHMANIOSE VISCERAL HUMANA”
PROGRAMA: Mestrado em Patologia Humana-UFBA /FIOCRUZ
DATA DE DEFESA: 07/08/2018

RESUMO

INTRODUÇÃO: A leishmaniose visceral (LV) é grave problema de saúde pública no Brasil, onde permanece com elevadas taxas de letalidade a despeito das tentativas de controle.

OBJETIVO: Identificar aspectos clínicos e laboratoriais admissionais associados ao óbito na LV.

MATERIAIS E MÉTODOS: trata-se de estudo de corte transversal retrospectivo incluindo os pacientes admitidos no Hospital Couto Maia (Salvador/Ba) com diagnóstico de LV entre janeiro de 2010 e dezembro de 2014. Variáveis epidemiológicas, clínicas e laboratoriais admissionais foram coletadas em instrumento padronizado e analisadas no software Stata® versão 13.0 na comparação entre os grupos de desfecho clínico (DC) de alta hospitalar (n=106) ou óbito (n=12).

RESULTADOS: Predominaram pacientes do sexo masculino (62,7%), da faixa etária pediátrica (53,4%), de procedência da área urbana de municípios do interior da Bahia com baixo Índice de Desenvolvimento Humano e de apresentação clínica clássica com hepatoesplenomegalia febril e citopenias. A letalidade média foi de 11,3%, superior a partir dos 40 anos de idade. As principais causas de óbito declaradas foram as insuficiências renal e hepática/hepatite, sepse/choque séptico, choque não especificado e coagulação intravascular disseminada. Comorbidades ocorreram em 19,5% dos pacientes e foi associada ao DC (p=0,043), assim como a presença de dor abdominal (p=0,022), edema (p=0,029), icterícia (p=0,000), redução do sensório (p=0,001), crepitação pulmonar (p=0,014), bulhas arrítmicas (p=0,027), coinfecção bacteriana (p=0,019) e alterações eletrocardiográficas (p=0,001). Apresentaram associação óbito níveis de plaquetas < 81.000/mm³ (p=0,004), albumina ≤ 2,2g/dL (p=0,032), ureia > 37 mg/dL (p=0,009),  bilirrubinas totais > 0,9 mg/dL (p=0,001), bilirrubina direta > 0,4mg/dL (p=0,002), atividade de protrombina ≤ 45% (p=0,008) e creatinina elevada para a idade (p=0,003). Os escores obtidos nos modelos prognósticos clínico (EC) e clinicolaboratorial (ECL) adotados pelo Ministério da Saúde do Brasil apresentaram concordância com o DC; EC ≥ 4 e ECL ≥ 6 foram significativamente associados ao óbito nesta amostra, com maior força de associação para o último (p=0,000).

CONCLUSÕES: O perfil clínico da amostra foi concordante com a literatura, porém algumas variáveis classicamente associadas ao óbito na LV, como sangramentos e valores de exames laboratoriais, não se mostraram significantes, ou se fizeram em diferentes pontos de corte, o que pode ser devido a variações populacionais ou ao delineamento do estudo, requerendo pesquisas mais robustas para a sua verificação. Os resultados para os EC e ECL nesta amostra refletem a importância de sua realização enquanto ferramenta de estratificação de risco dos pacientes diagnosticados com LV. Espera-se que este estudo possa contribuir no diagnóstico situacional da doença na população local e na identificação de questões-chave a serem aprofundadas através de diferentes metodologias.

Palavras-chave: leishmaniose visceral, morte, prognóstico.

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AUTORIA: Jéssica Rebouças Silva
ORIENTAÇÃO: Valéria de Matos Borges
TÍTULO DA DISSERTAÇÃO: “AVALIAÇÃO DO EFEITO LEISHMANICIDA IN VITRO E IN VIVO DE CARREADORES LIPÍDICOS NANOESTRUTURADOS COM ANFOTERICINA B (CLN-AnB) NA INFECÇÃO POR LEISHMANIA BRAZILIENSIS”
PROGRAMA: Mestrado em Patologia Humana-UFBA /FIOCRUZ
DATA DE DEFESA: 01/08/2018

RESUMO

O arsenal terapêutico para tratamento da leishmaniose possui sérias limitações, como alto custo e toxicidade. Projetar sistemas estáveis de entrega de drogas baseados em nanotecnologia é umas das principais estratégias no combate à doença. Os Carreadores Lipídicos Nanoestruturados com Anfotericina B (CLN-AnB) estão emergindo como uma abordagem promissora devido à alta capacidade de carregamento de drogas, perfil de liberação controlado dos fármacos veiculados, maior estabilidade e reduzido custo. Neste trabalho, demonstramos pela primeira vez o potencial efeito leishmanicida in vitro e in vivo dos CLN-AnB na infecção por L. braziliensis. O CLN-AnB mostrou-se menos tóxico em relação à anfotericina livre (AnB) e à anfotericina desoxicolato (AnB-D) em avaliação in vitro. A contagem de promastigotas viáveis, recuperadas no sobrenadante de macrófagos murinos infectados revelou IC50 de 5.3 ± 0.558; 13 ± 0.577 e 11.7 ± 1.73 ng/mL e índice de seletividade de 813; 830 e 1046, para AnB, AnB-D e CLN-AnB, respectivamente. As análises por microscopia confocal mostraram a captação dos CLNs por macrófagos infectados já após uma hora de incubação e sua maior entrada com 48 horas. O efeito imunomodulador das formulações foi avaliado pela quantificação de óxido nítrico (NO) e fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) no sobrenadante de macrófagos infectados e tratados com o IC50 das formulações. Somente a AnB foi capaz de induzir significativamente NO e TNF-α. Para avaliação in vivo, camundongos BALB/c foram infectados na derme da orelha com L. braziliensis e tratados com antimonial pentavalente (Sb5+, Glucantime®), anfotericina lipossomal (AnB-L, Ambisome®) ou com CLN-AnB. Após seis semanas de infecção, a análise do tamanho da lesão e da carga parasitária da orelha infectada mostrou eficácia semelhante entre o Sb5+ e o CLN-AnB quando comparado com animais que não receberam tratamento. Os resultados mostraram características quanto à segurança e a eficácia do CLN-AnB na a infecção in vitro e in vivo por L. braziliensis. Mais estudos são necessários para consolidar o tratamento CLN-AnB como uma nova formulação promissora de anfotericina B para tratamento da leishmaniose tegumentar.

Palavras-chave: Leishmaniose Cutânea; L. braziliensis; Anfotericina B; Tratamento; Nanocarreadores; Macrófago.

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AUTORIA: Beatriz Rocha Simões Dias
ORIENTAÇÃO: Patrícia Sampaio Tavares Veras
TÍTULO DA TESE:“ESTUDO DA CONTRIBUIÇÃO DA AUTOFAGIA PARA A SUSCEPTIBILIDADE POR L. AMAZONENSIS OU RESISTÊNCIA POR L. MAJOR NA INFECÇÃO DE MACRÓFAGOS MURINOS DA LINHAGEM CBA”.
PROGRAMA: Doutorado em Patologia Humana-UFBA /FIOCRUZ
DATA DE DEFESA: 31/07/2018

RESUMO

Macrófagos de camundongos CBA controlam a infecção por Leishmania major, no entanto, são permissivos à infecção por Leishmania amazonensis. Os estudos conduzidos, até o momento, sobre o papel desempenhado pela autofagia na infecção por Leishmania levaram a dados controversos. Portanto, no presente trabalho, avaliamos se a resposta autofágica de macrófagos infectados pode ser responsável pela diferença no curso da infecção por essas duas cepas de Leishmania. Inicialmente, demonstramos por qPCR que um número maior de genes relacionados à autofagia é modulado positivamente em células infectadas por L. amazonensis em comparação às infectadas L. major. Resultado similar foi obtido por meio da análise de dados de microarranjos públicos utilizando o Ingenuity Pathway Analyses (IPA). Análises adicionais pelo IPA demonstraram que no contexto Affects Autophagy of Cells e Decreases Autophagy of Cells 39 e 14 genes, respectivamente, apresentaram modulação oposta entre os macrófagos infectados com L. amazonensis daqueles infectados com L. major. Em seguida, demonstramos que após 24 h de infecção, a relação LC3-II/Act mostrou-se aumentada tanto em macrófagos infectados por L. amazonensis quanto nos infectados por L. major em comparação com controles não infectados, mas menos do que em células tratadas com cloroquina. Isto sugere que L. amazonensis e L. major ativam a autofagia em macrófagos infectados, sem alterar o fluxo autofágico. Além disso, as células infectadas por L. major exibiram percentuais mais elevados de vacúolos parasitóforos marcados com DQ-BSA (50%) do que aquelas infectadas por L. amazonensis (25%). No entanto, vacúolos parasitóforos induzidos por L. major ou L. amazonensis acumularam LysoTracker de maneira similar, indicando que a acidez em ambos os compartimentos é equivalente. Após 24 h de infecção, um maior percentual de vacúolos positivos para LC3 foi observada em células infectadas por L. amazonensis (42,36%) em comparação àquelas infectadas por L. major (18,10%). Em seguida, avaliamos se a modulação da autofagia exerceu influência na infecção por Leishmania em macrófagos de camundongos CBA. Nenhuma alteração significativa foi observada tanto na taxa de infecção quanto na carga parasitária nos macrófagos com os inibidores ou indutores autofágicos em comparação com as células controle não tratadas. Curiosamente, tanto a indução farmacológica quanto a fisiológica da autofagia aumentaram a viabilidade intracelular de L.amazonensis e L. major, enquanto a inibição da autofagia não teve efeito sobre a viabilidade intracelular desses parasitas. Por fim, demonstramos que a indução da autofagia reduziu a produção de NO por macrófagos infectados por L. amazonensis ou L. major, mas não alterou a atividade da arginase. Interessantemente, a análise de componentes principais e análise hierárquica de clusters discriminaram completamente os macrófagos infectados por L. major de células infectadas por L. amazonensis de acordo com a intensidade da infecção e características autofágicas dos vacúolos induzidos por essas duas cepas. Em conclusão, a infecção por L. amazonensis ou L. major, apesar de ativar similarmente o fluxo autofágico em macrófagos infectados e os parasitos terem sua viabilidade favorecida pela indução da autofagia, promove expressão diferenciada de genes relacionados à autofagia e interação distinta dos vacúolos parasitóforos com compartimentos autofágicos. Essas diferenças são capazes de separar completamente os macrófagos infectados por L. amazonensis daqueles por L. major.

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AUTORIA: Naiara Abreu Fraga Braghiroli
ORIENTAÇÃO: Luiz Antonio Rodrigues de Freitas
TÍTULO DA TESE: “MICROSCOPIA CONFOCAL DE REFLECTÂNCIA (MCR) NO DIAGNÓSTICO DE NEOPLASIAS DA PELE.”
PROGRAMA: Doutorado em Patologia Humana-UFBA /FIOCRUZ
DATA DE DEFESA: 25/07/2018

RESUMO

INTRODUÇÃO: Desde sua introdução na prática da clínica médica, a Microscopia Confocal de Reflectância (MCR) vem contribuindo no diagnóstico não invasivo de neoplasias benignas e malignas da pele. Ela tem sido utilizada como ferramenta auxiliar em lesões com achados equívocos ao exame clínico e dermatoscópico. A MCR tem reduzido substancialmente a necessidade de realização de biópsias de lesões benignas, especialmente em locais anatômicos de difícil acesso cirúrgico. Os resultados obtidos tem demonstrado excelente correlação com os aspectos histológicos, articulando-se como uma ponte entre a dermatoscopia e a histopatologia. Os aprimoramentos tecnológicos na funcionalidade e dimensões das sondas, e a subsequente disponibilização de equipamentos mais compactos, como o Vivascope 1500 e o Vivascope 3000, vêm, progressivamente, revolucionando a abordagem médica das neoplasias cutâneas. Assim, a MCR é atualmente reconhecida como uma ferramenta adjunta no diagnóstico in vivo não invasivo de neoplasias cutâneas, na delimitação de imagens tumorais e no monitoramento da resposta ao tratamento não cirúrgico do câncer de pele.

OBJETIVO: O presente trabalho lida com o estabelecimento de critérios na MCR de lesões cutâneas equívocas, e correlaciona as características observadas com os aspectos histológicos, no sentido de validar uma ferramenta diagnóstica não invasiva, que permita diferenciar, com significativa precisão, as neoplasias benignas e malignas da pele.

CONCLUSÕES: Os aspectos morfológicos observados à MCR na avaliação das estruturas da pele mostram equivalência com os achados histológicos, permitindo plena comparação entre as imagens da microscopia confocal e as imagens histopatológicas. O equipamento de MCR com pistola portátil (handheld ) (HH-RCM) permite o acesso a áreas anatômicas curvadas e pode ser aplicado diretamente à superfície cutânea, sem a necessidade do anel de fixação, tornando o exame da microscopia confocal mais factível e rápido. O modelo HH-RCM é capaz de diagnosticar com precisão pápulas solitárias faciais inespecíficas, dentre elas: carcinoma basocelular (CBC), tricoblastoma desmoplásico, carcinoma escamocelular (CEC), hiperplasia sebácea e nevo melanocítico intradérmico. O equipamento tradicional para realização da MRC, assim como o modelo portátil HH-RCM, demonstram um alto valor preditivo positivo no diagnóstico do CBC. O modelo tradicional mostra um valor preditivo negativo maior que o modelo portátil, devido ao seu campo de visão mais largo, oferecendo uma visão da arquitetura total das lesões maiores que 1,0 mm. A MCR se mostrou precisa no diagnóstico de ceratose seborréica clonal, enquanto que, ao exame clínico e à dermatoscopia, aparenta aspecto semelhante ao melanoma maligno da pele. A mucinose dérmica focal, apesar de clinicamente se assemelhar ao CBC, mostra características na MCR que permitem sua diferenciação do CBC. A MCR permite caracterizar o CEC pigmentado pela presença do padrão de favo de mel atípico nas camadas granulosa e espinhosa da epiderme, associado a presença dos pequenos círculos brilhosos ao redor das papilas dérmicas. O padrão de distribuição dos vasos ao nível da junção dermo-epidérmica e derme papilar é relevante para o diagnóstico do CEC cutâneo. O sinal da “casa de botão” na MCR associado ao padrão de favo de mel atípico ao nível epidérmico é importante no diagnóstico do CEC in situ.

Palavras-chaves: Microscopia confocal de reflectância; Câncer de pele; Carcinoma basocelular; Carcinoma espinocelular; Ceratose seborréica clonal; Lesões equívocas cutâneas; Mucinose dérmica focal; Neoplasia cutânea; Tricoepitelioma desmoplásico

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AUTORIA: Ítalo Eustáquio Ferreira
ORIENTAÇÃO: Mitermayer Galvão dos Reis
TÍTULO DA DISSERTAÇÃO: “Identificação de Neisseria meningitidis em portadores assintomáticos através da técnica de PCR em tempo real”.
PROGRAMA: Mestrado em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa
DATA DE DEFESA: 16/07/2018

RESUMO

INTRODUÇÃO: A cultura é considerada a metodologia padrão ouro para a identificação de N. meningitidis. Entretanto, o emprego de técnicas moleculares, como a PCR em tempo real (qPCR) tem melhorado a capacidade de detecção do meningococo. Nos estudos em portadores, a qPCR empregando o gene sodC como alvo tem sido indicada.

OBJETIVO: O presente estudo teve como objetivo avaliar a técnica de qPCR (sodC) para a identificação de N. meningitidis, a partir de material de orofaringe mantido em meio de transporte STGG, coletado de portadores assintomáticos.

MATERIAL E MÉTODOS: O ensaio da qPCR foi padronizado e validado com critérios locais e a metodologia comparada com os resultados obtidos previamente a partir da cultura. Foram utilizadas um total de 1200 amostras de material de orofaringe mantidas em meio de transporte STGG a -70°C. Os ensaios da qPCR foram realizados empregando o cycle threshold (Ct) padrão (Ct≤35) e o Ct≤37 validado neste estudo.

RESULTADOS: Através da qPCR (Ct≤35) foram obtidas um total de 84 (7%) amostras positivas (Ct médio= 30,4 ± 3.1; 95% IC 29,7-31) em comparação com a cultura (n=59; 4,9%), enquanto a qPCR (Ct≤37) permitiu a identificação de 99 (8,3%) amostras positivas (Ct médio= 35,6 ± 5,1; 95% IC 35,3-36). Apenas uma amostra positiva na cultura não foi identificada através da qPCR (Ct≤37). A concentração de DNA na etapa prévia de extração melhorou a capacidade de detecção de amostras positivas na qPCR. A caracterização dos genogrupos de N. meningitidis através da qPCR mostrou a presença de amostras não-grupáveis.

CONCLUSÔES: Os resultados obtidos neste estudo mostram que a qPCR (Ct≤37) é uma alternativa eficaz para a identificação e caracterização de N. meningitidis a partir do meio de transporte STGG, devendo ser empregada em associação à cultura nos estudos de portadores de N. meningitidis.

Palavras-Chave: Neisseria meningitidis, identificação, qPCR, portadores.

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AUTORIA: Viviane de Matos Ferreira
ORIENTAÇÃO: Mitermayer Galvão dos Reis
TÍTULO DA DISSERTAÇÃO: “Prevalência de portadores de Neisseria meningitidis em estudantes de 18 a 24 anos de um centro universitário”
PROGRAMA: Mestrado em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa
DATA DE DEFESA: 18/07/2018

RESUMO

 INTRODUÇÃO: Em 2010, o Brasil introduziu a vacina meningocócica C conjugada (MCC) no Programa Nacional de Imunização para crianças <5 anos de idade. Em Salvador, houve uma ampliação da campanha para a faixa etária de 10 a 24 anos, pretendendo atingir os indivíduos mais afetados. A investigação do papel dos portadores saudáveis na disseminação da doença meningocócica na comunidade pode contribuir com informações úteis para subsidiar condutas apropriadas de vacinação.

OBJETIVO: O objetivo deste estudo foi determinar a prevalência de portadores de  N. meningitidis (Nm) e caracterizar molecularmente os isolados coletados de adultos jovens em um centro universitário em Salvador, após 6 anos de introdução da MCC.

MATERIAL E MÉTODOS: Entre agosto e novembro de 2016, um total de 407 swabs orofaríngeos foram coletados de estudantes entre 18 e 24 anos. A identificação das cepas de Nm foi realizada a partir de métodos clássicos e qPCR. A caracterização molecular dos isolados foi realizada através do sequenciamento do genoma total (WGS). Também foram analisados os fatores de associados potenciais para a colonização.

RESULTADOS: A prevalência de portadores foi de 12,3% (50/407). O estado de portador foi associado ao gênero masculino (RP_A: 1,88 IC95% 1,05 – 3,38; p=0,034), ao contato próximo com indivíduos com doença meningocócica (RP_A: 2,00 95% IC 0,69 – 5,18, p=0,200) e a frequência a festas/bares pelo menos uma vez por mês (RP_A: 3 22 95% IC 1,43 – 7,25; p = 0,005). Um total de 221 (54,3%) indivíduos relataram terem sido imunizados pela MCC. Não houve diferença na colonização por Nm entre indivíduos vacinados e não vacinados. Dos 50 portadores de Nm, 46 isolados foram identificados pela cultura e 4 foram detectados apenas por qPCR. A maioria dos isolados (92%; 46/50) apresentou-se como não grupável (WGS e qPCR), 6% (3/50)  pertenciam ao genogrupo B (WGS)  e 2% (1/ 50) foi classificado como genogrupo C (qPCR). Um total de 58% (29/50) dos isolados apresentaram deleção da cápsula (cnl). Foram identificadas 24 sequências tipo (STs), incluindo 22 STs pertencentes a 11 complexos clonais definidos (CCs) e 6 novos STs. O complexo clonal mais frequente foi cc198, representando 26% dos isolados. As variantes PorA e FetA mais predominantes foram P1.18,25-37 (15,21%) e F5-5 (43,47%), respectivamente. Todos os isolados apresentaram proteína PorB classe 3 e FHbp, sendo a subfamília A / v2-3 da FHbp presente em 87% dos isolados. Apenas um isolado possuiu a variante NadA-6.177. Todos os isolados apresentaram NHBA, com p010 e p0912 representando 28,26% e 13,04% dos isolados, respectivamente.

CONCLUSÕES: Os nossos resultados demonstraram que a colonização por Nm consistiu principalmente de cepas não-agrupáveis com alto grau de diversidade genética. A identificação de apenas um indivíduo colonizado pelo genogrupo C pode ter sido uma consequência da imunização pela MCC em 2010, o que pode ter contribuído para a redução da circulação do sorogrupo C. 

Palavras-chave: Neisseira meningitidis, portador, colonização, sorogrupo

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AUTORIA: Ícaro Bonyek Santos da Silva
ORIENTAÇÃO: Natália Machado Tavares
TÍTULO DA DISSERTAÇÃO: “A INFLUÊNCIA DO DIABETES NA PATOGÊNESE DA LEISHMANIOSE CUTÂNEA: O PAPEL DO LEUCOTRIENO B₄.”
PROGRAMA: Mestrado em Patologia Humana-UFBA /FIOCRUZ
DATA DE DEFESA: 17/07/2018

INTRODUÇÃO: A leishmaniose permanece como uma das doenças tropicais mais negligenciadas do mundo. A resposta imune do hospedeiro contra a Leishmania tem um papel crítico na eliminação dos parasitas, mas também é responsável pela inflamação e gravidade da doença. A forma cutânea localizada (LCL) é caracterizada pela presença de uma única lesão ulcerada na pele e inflamação descontrolada. A suscetibilidade aumentada de infecções de pele é uma das complicações do diabetes. Quando comparada ao estado euglicêmico, a hiperglicemia leva a alterações na produção de citocinas e quimiocinas pró-inflamatórias, principalmente pelo aumento da produção de leucotrieno B4 (LTB4), um mediador lipídico inflamatório.

OBJETIVO: Nesse contexto, o presente estudo teve como objetivo avaliar a influência do diabetes no resultado do LCL humano, considerando o papel do LTB4.

MATERIAL E MÉTODOS: Primeiramente, foram medidos os níveis séricos de mediadores inflamatórios, como LTB4, PGE2, IL-1β, IL-6, TNF-α e IL-10 por ensaio imunoenzimático (ELISA) em pacientes euglicêmicos ou hiperglicêmicos com LCL. Em seguida foi feito uma correlação com dados clínicos, como glicose, tempo, tamanho, número e área da lesão. Para determinar à suscetibilidade a infecção por Leishmania braziliensis, foi feito a infecção de macrófagos de indivíduos diabéticos ou não, cultivados em condições com baixa e alta concentração de glicose. O sobrenadante da cultura foi destinado a mensuração do LTB4 e as células para análise da expressão gênica de receptores do tipo Toll (TLR) e do BLT1.

RESULTADOS: Detectamos aumento de LTB4, IL-6 e TNF-α no plasma de pacientes diabéticos com LCL comparado a não diabético. Interessantemente, apenas o LTB4 apresentou correlação positiva com o tempo de cicatrização. Os ensaios in vitro indicam que a glicose aumenta a taxa de infecção e a viabilidade de parasitos de maneira dose-dependente em macrófagos humanos infectados por L. braziliensis. Além disso, a alta concentração de glicose modula negativamente BLT1, TLR2 e TLR4.

CONCLUSÃO: Juntos, esses resultados sugerem que pacientes diabéticos produzem altos níveis de LTB4 e que este está relacionado com o tempo de cicatrização. Além disso, altas concentrações de glicose aumentam a suscetibilidade de macrófagos à infecção por L. braziliensis através da modulação negativa de BLT1, TLR2 e TLR4 diminuindo assim, a ação do LTB4 produzido exacerbadamente.

Palavras-chave: LTB4; Diabetes; Leishmania baziliensis; Inflamação.

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