Autoria: Isabela Machado Serrano
Orientação: Mitermayer Galvão dos Reis
Co-orientação: Fred Luciano Neves Santos
Título da dissertação: “CARACTERIZAÇÃO DO PERFIL DE IMUNOGLOBULINAS DE INDIVÍDUOS INFECTADOS PELO Trypanosoma cruzi”
Programa: Pós-Graduação em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa
Data de defesa: 1ª/06/2022
Horário: 15h00
Local: Sala virtual do Zoom

RESUMO

INTRODUÇÃO: a doença de Chagas (DC) é causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi e sua manifestação clínica varia de assintomática até o comprometimento cardíaco grave, que depende, dentre outros fatores, da resposta imune do hospedeiro durante o curso da infecção. Os isotipos de imunoglobulinas possuem características distintas de estrutura, função e grau de participação na patogenia da doença, e o estudo acerca destes componentes pode elucidar os mecanismos imunopatogênicos envolvidos na DC. OBJETIVO: correlacionar o perfil de imunoglobulinas de indivíduos infectados pelo T. cruzi com as formas clínicas da fase crônica da doença de Chagas. MATERIAL E MÉTODOS: as amostras séricas foram oriundas de Instituições parceiras, localizadas em diferentes estados do Brasil (Pernambuco, Bahia e Goiás) no período de 1978 a 2020. Os indivíduos diagnosticados com DC crônica foram classificados quanto à forma clínica da doença. Para identificação do perfil de imunoglobulinas (IgG total, IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4), foi realizado o método ELISA indireto utilizando o antígeno recombinante quimérico IBMP-8.4 como agente de captura. Para correlação do quantitativo de anticorpos com as fases clínicas, foram utilizados os testes estatísticos Spearman e Fisher, paralelamente. RESULTADOS: Foram obtidas 97 amostras de soro, classificadas após sorologia para T. cruzi e análise clínica como: negativas (NEG, n = 38); forma indeterminada (IND, n = 24); forma cardíaca leve (CL, n = 20) e forma cardíaca grave (CG, n = 15). Os isotipos de IgG foram encontradas em quase todas as amostras e o isotipo IgG1 apresentou maiores níveis em relação aos outros isotipos, com diferença significativa entre os grupos CL e IND. O isotipo IgG3 apresentou-se mais elevada nos indivíduos CL, quando comparados aos do grupo CG. CONCLUSÕES: os isotipos IgG1 e IgG3 são biomarcadores que podem ser utilizados na avaliação da progressão da DC, ao demonstrarem diferenças entre os grupos clínicos. Sugere-se estudos de acompanhamento dos casos, com avaliação da associação da cinética dos anticorpos com a evolução de lesões teciduais.
Palavras-chave: anticorpos; isotipos; prognóstico; doença de Chagas.

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Autoria: Luana Evangelista de Araújo
Orientação: Sérgio Marcos Arruda
Título da dissertação: “Detecção de anticorpos IgG e IgM responsivos aos extratos lipídicos de Mycobacterium tuberculosis”
Programa: Pós-Graduação em Patologia
Data de defesa: 13/06/2022
Horário: 09h00
Local: Sala virtual do Zoom

RESUMO

INTRODUÇÃO: Tuberculose (TB), doença infecciosa crônica causada pelo Mycobacterium tuberculosis (Mtb), é considerada um grave problema para a saúde pública. Cerca de 40% do peso seco da parede do Mtb é composta por lipídios. Grande parte do genoma bacteriano é dedicado à biossíntese e degradação dessas moléculas. O Mtb contém transportadores os quais estão envolvidos na importação desses lipídios através da parede celular que são codificados pelos operons mce 1 a 4. Em um estudo recente, foi demonstrado em modelo in vitro que o Mtb, ao reprimir a expressão do operon mce1, é capaz de modificar a composição lipídica de sua parede celular, acumulando ácidos micólicos livres. Outro estudo demonstrou que os lipídios do Mtb apresentam capacidade distinta de ativar a resposta pró-inflamatória em macrófagos murinos e em células T humanas. Assim, por serem moléculas importantes para a virulência do bacilo e por serem capazes também de estimular uma resposta imune celular no hospedeiro, nessa dissertação, exploramos se os lipídios do Mtb são capazes de estimular uma resposta humoral com a produção de imunoglobulinas (Igs) que possam ser detectadas no soro humano, em diferentes populações. OBJETIVO: Avaliar os níveis de IgG e IgM responsivos aos extratos lipídicos do Mtb, da cepa selvagem e mutante no operon mce1, além de identificar se essas Igs podem ser exploradas como possíveis marcadores de doença e infecção tuberculosa. MATERIAL E MÉTODOS: Voluntários foram convidados para participar de um estudo de corte transversal mediante a assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido (TCLE). Os soros desses indivíduos foram coletados e armazenados a -80ºC até a sua utilização. Ensaios de ELISA foram realizados para identificar a detecção de anticorpos IgG e IgM contra os extratos lipídicos do Mtb adsorvidos nas placas. A avaliação dos níveis dessas Igs foi realizada através do índice de reatividade (IR), média geométrica e intervalo de confiança (IC) de 95%, além disso alguns parâmetros de desempenho dos testes foram avaliados como curva ROC, sensibilidade, especificidade, acurácia, dentre outros. RESULTADOS: Observa-se que as características clínicas e demográficas dos grupos selecionados para o estudo são bem similares. Os ensaios realizados demonstram que não há uma diferença significativa na dosagem dos anticorpos entre os grupos em estímulo aos extratos lipídicos do Mtb de ambas as cepas, com exceção dos níveis de IgG e IgM em estímulo aos lipídios da cepa selvagem no grupo de indivíduos com outras doenças pulmonares (ODP) em relação aos demais. CONCLUSAO: Os extratos lipídicos do Mtb apresentaram capacidade limitada em diferenciar os grupos testados no estudo pelas dosagens de IgG e IgM. Entretanto, observou-se um aumento nos títulos de anticorpos responsivos aos extratos lipídicos do Mtb no grupo ODP, o qual pode ser explorado como um teste diferencial de triagem. Além disso, mais estudos devem ser realizados buscando avaliar o papel de espécies lipídicas isoladas do Mtb como possíveis marcadores de prognóstico ou diagnóstico da doença, como forma de aumentar a sensibilidade e especificidade dos testes. Palavras-chave: Tuberculose, Lipídios, Testes sorológicos.

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Autoria: Keila de Oliveira Diniz
Orientação: Maria da Conceição Chagas de Almeida
Título da tese: “COMPORTAMENTO SEDENTÁRIO E DIABETES MELLITUS NO ELSA-BRASIL”
Programa: Pós-Graduação em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa
Data de defesa: 30/05/2022
Horário: 09h00
Local: Sala virtual do Zoom

RESUMO

Introdução: O comportamento sedentário (CS) é o tempo gasto sentado, deitado ou reclinado. Estudos sobre esse assunto são relativamente recentes e tem aumentado nas últimas décadas uma vez que esse tipo de  comportamento eleva os riscos de adoecimento. Objetivo: Estimar a prevalência, fatores associados e a relação do comportamento sedentário para a diabetes mellitus no ELSA- Brasil. Método: Estudo transversal com todos os participantes da segunda etapa (2012-2014) do ELSA-Brasil. Foram calculadas proporções para as variáveis categóricas e medidas de tendência central e dispersão para as varáveis contínuas. A prevalência de tempo sentado de tela no lazer foi apresentada com os seus respectivos valor-p e utilizou-se a regressão de Poisson robusta com modelo hierárquico; foram empregados modelo de regressão logística tendo a DM como variável dependente e foram testados potenciais modificadores de efeito (ME) e confundimento. Para avaliação do modelo final foi utilizada a curva ROC e o teste de bondade de ajuste do modelo. Resultado: Foram incluídos no estudo 13.518 indivíduos. Mais da metade dos participantes tinha ensino superior completo, referiu raça/cor branco e tinha situação ocupacional ativa. A frequência de tempo de tela no lazer foi de 21,8% para os homens e 17,7% para as mulheres. A maior prevalência de tempo de tela no lazer foi observada entre os participantes homens e mulheres com até ensino fundamental e ensino médio completo, fumantes, que consomem álcool excessivamente, que tinham diabetes, obesidade e obesidade abdominal. Houve associação positiva em ambos os sexos nas variáveis fumante, obesidade e obesidade abdominal; e somente para as mulheres a idade. A maior prevalência de DM foi observada na faixa etária de 60 anos ou mais, entre aposentados/as, participantes de raça/cor preta, insuficientemente ativos/as, com maior tempo de tela no lazer, com hipertensão e sobrepeso/obesidade. Após ajuste, houve associação a DM com as variáveis tempo de tela no lazer dia de semana; tempo de tela no lazer final de semana; e tempo total de tela no trabalho/lazer dia de semana para os homens. E para as mulheres tempo sentado no final de semana e o tempo de tela no lazer final de semana que teve como modificadora de efeito o sobrepeso/obesidade. Conclusão: Reduzir o tempo de tela no lazer atuando
nos fatores comportamentais e naqueles relacionados a saúde levando em consideração as características sociodemográficas, pode resultar em benefícios importantes para a saúde da população estudada. O tempo de tela no lazer dia de semana, o tempo de tela no final de semana, o tempo total de tela no trabalho/lazer dia de semana e o tempo sentado final de semana apresentou associação estatisticamente significante com a DM. Incentiva-se a inclusão de diretrizes que aprimorem as políticas públicas direcionadas ao controle de DM através de estratégias para diminuir o tempo sedentário em frente a tela e/ou sentado acumulado em atividades laborais e no lazer, além de promover hábitos saudáveis e a prática de atividade física no tempo livre. Essas recomendações poderão impactar na saúde da população e proteger contra os principais fatores de risco para DM.

Palavras-chave: comportamento sedentário; tempo de tela; diabetes mellitus; atividade física; adulto.

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Autoria: Reginaldo Brito dos Santos Júnior
Orientação: Washington Luís Conrado dos Santos
Título da dissertação: “Diferenciação de células B e plasmocitose no curso da desorganização esplênica na leishmaniose visceral: um estudo experimental em hamsters”.
Programa: Pós-Graduação em em Patologia Humana
Data de defesa: 24/05/2022
Horário: 13h00
Local: Sala virtual do Zoom

RESUMO

Introdução: A leishmaniose visceral (LV) é uma doença infecciosa causada pela Leishmania infantum, em que há o comprometimento de órgão internos. No baço a infecção é crônica e progressiva. Além disso, na LV grave  corre a desorganização dos compartimentos esplênicos, a diminuição do número de células B na polpa branca (PB) e plasmocitose na polpa vermelha (PV). Os plasmócitos têm sobrevida estendida e acumulam-se em várias doenças crônicas. Contudo, pouco se sabe sobre as funções e os mecanismos de geração e manutenção da sobrevida dessas células. Objetivo: Neste trabalho, investigamos os potenciais mecanismos associados com o desenvolvimento anômalo de células B que levam à plasmocitose no curso da LV. Métodos: 56 hamsters da linhagem Golden Sirius com 6 a 8 semanas de idade foram usados neste estudo: 28 foram injetados intraperitonealmente com 1×107 promastigotas de L. infantum e 28 receberam a solução diluente pela mesma via. Sete animais de cada grupo foram eutasiados 30, 60, 120 e 150 dias após a injeção (dpi). Os animais foram necropsiados e amostras dos órgãos foram fixadas em parafina para estudo histológico e avaliação da distribuição de célula B e plasmócitos por imuno-histoquímica. Para três animais de cada grupo e em cada ponto, um fragmento do baço foi colhido para avaliação transcriptômica da expressão gênica e associação entre moléculas relacionadas com o desenvolvimento de células B, incluindo uma molécula chamada DLK1. Resultados: Houve aumento da PB dos animais infectados 120 dpi, enquanto, no ponto consecutivo ocorreu atrofia, após 150 dias. Afetando a região de folículo linfoide, possivelmente devido a diminuição de células B. Também observamos redução da quimiotaxia de células B, pela diminuição de CXCL13 e CXCL12 que ocorreu 120 e 150 dpi. Houve uma tendência a diminuição de fatores moleculares relacionados com a resposta de centro germinativo (CG), observado pela expressão gênica dos hamsters infectados. Não houve alterações na quantidade de células B na PV dos animais infectados, mas houve progressiva plasmocitose na PV dos animais nos pontos mais tardios da doença, 120 e 150 dpi e o acúmulo dessas células na zona de células T 120 dpi, sendo que DLK1 está associada com a plasmocitose na PV. A expressão gênica dos animais infectados confirmou a diferenciação de plasmócitos 150 dpi e associou a sinalização por IL-21 e IFN- como as principais moléculas envolvidas. Além disso, houve o aumento de IL-6 150 dpi. Conclusões: Neste estudo correlacionamos alterações estruturais e celulares com a expressão molecular, para investigar os determinantes da diferenciação anômala de células B em formas graves da LV. Os resultados deste trabalho demonstram aumento de IL-21 e INF- como moléculas responsáveis pelas alterações nas vias de diferenciação de células B, que geram plasmócitos em estágio crônico da doença. Além disso, demonstramos uma diminuição de CXCL13 e CXCL12, e um aumento de IL-6. Houve aumento da proporção de células B 120 dpi, mas diminuição em 150 dpi na PB e plasmocitose na PV. Palavras chaves: Plasmócitos; Expressão gênica; DLK1; Imuno-histoquímica

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Autoria: Karoline Almeida Felix de Souza
Orientação: Bruno Solano de Freitas Souza
Co-orientadora: Carolina Kymie Vasques Nonaka
Título da dissertação: “OTIMIZAÇÃO DE ENSAIOS MOLECULARES PARA O DIAGNÓSTICO DA COVID-19 ”
Programa: Pós-Graduação em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa
Data de defesa: 27/05/2022
Horário: 09h00
Local: Sala virtual do Zoom

RESUMO

INTRODUÇÃO: Para o controle da pandemia de SARS-CoV-2 a testagem em massa se revelou fundamental. No entanto, sua implementação possui alguns gargalos, especialmente em populações de baixo índice socioeconômico, já que a metodologia padrão-ouro para detecção do SARS-CoV-2 é o RT-PCR em amostras de swab nasofaríngeo, exigindo infraestrutura dedicada à coleta, laboratórios sofisticados e equipe especializada. Portanto, a necessidade de testes rápidos, simples e precisos para diagnosticar a infecção por SARS-CoV-2 é de extrema importância, bem como a validação destes ensaios em outras alternativas de amostras de mais fácil obtenção, como a saliva. Os sistemas utilizando CRISPR para o diagnóstico de COVID-19 tem se apresentado como promissores, já que apresentam alta sensibilidade, rapidez de detecção e não requerem laboratórios especializados. OBJETIVO: Otimizar métodos moleculares para a detecção do SARS-CoV-2 em amostras de saliva e validar um protótipo de teste molecular “point of care” baseado na tecnologia CRISPR/Cas12. METODOLOGIA: Trata-se de um estudo de corte transversal envolvendo 103 participantes, no período de março a maio de 2021, submetidos à coleta de amostras pareadas de swab nasofaríngeo e saliva. Para a validação do RT-PCR em amostras de saliva, foram utilizados três kits comerciais e diferentes protocolos pré-analíticos envolvendo a etapa de extração e condições de armazenamento/estabilidade das amostras. Para o teste rápido com CRISPR/Cas12 foram avaliadas 29 amostras no período de janeiro a fevereiro de 2022 e desenhados três de grupos de primers para a reação de amplificação isotérmica (LAMP) e os respectivos gRNAs com primers fluorescentes para a detecção do complexo RNA-proteína através da clivagem no fluxo lateral. RESULTADOS: Observou-se 100% e 89,1% de concordância comparando AllplexTM e TaqPathTM com RT-PCR em amostra de swab, respectivamente. A análise de estabilidade da saliva demonstrou capacidade de detecção do SARS-CoV-2 mesmo em amostras armazenadas por 30 dias a -80oC. O ensaio CRISPR/Cas12 mostrou 100% de concordância entre os resultados obtidos por RT-PCR, com limite de detecção de 15,6 PFU. Não foi observada reação cruzada com outros vírus respiratórios. O método RT-PCR apresentou uma sensibilidade de aproximadamente 8 cópias de RNA/µL e o CRISPR/Cas12 de 84 cópias de RNA/µL. CONCLUSÃO: A saliva é uma amostra sensível para o diagnóstico da COVID-19. Nosso estudo mostra evidências de que é possível identificar indivíduos com infecção assintomática sem a necessidade de extração de RNA e solução estabilizadora de RNA, tornando assim o diagnóstico de saliva promissor para testes diretos na rotina laboratorial. O ensaio CRISPR/Cas12 oferece uma alternativa promissora mais rápida para a detecção de SARS-CoV-2, mas novos estudos são necessários para que este método seja validado.
Palavras-Chave: Saliva, COVID-19, CRISPR, diagnóstico.

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Autoria: Pamela dos Santos N. de Santana
Orientação: Deborah B. Mothé Fraga
Co-orientadora: Moyra Machado Portilho
Título da dissertação: “AVALIAÇÃO DE MÉTODOS SOROLÓGICOS PARA DETECÇÃO DE ANTICORPOS DOS TIPOS IgM E IgG CONTRA O SARS-COV-2 ”
Programa: Pós-Graduação em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa
Data de defesa: 17/05/2022
Horário: 14h00
Local: Sala virtual do Zoom

RESUMO

Introdução: No final de 2019, em Wuhan, China, foi detectado um surto de pneumonia semelhante à Síndrome Respiratória Aguda (SARS), causada pelo coronavírus denominado SARS-CoV. Ao investigar o surto, foi identificado que o agente etiológico deste também era um coronavírus, e assim, este foi denominado SARS-CoV-2, causador da doença denominada COVID-19, declarada como pandemia em março de 2020. O diagnóstico da COVID-19 pode ser feito através da anamnese clínica e pelo diagnóstico laboratorial, tendo como padrão ouro a reação em cadeia da polimerase em tempo real. Há também ferramentas sorológicas, como testes rápidos (TR) e o ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA), cujos desempenhos precisam ser avaliados.

Objetivo: Comparar o desempenho de métodos sorológicos de detecção de anticorpos específicos contra o SARS-CoV-2 em uma amostra da população de Salvador – Bahia.

Materiais e Métodos: A partir de uma amostra da população de Salvador-BA, foi avaliado o desempenho de três testes rápidos (TRs): TR Panbio™ COVID-19 IgG/IgM – Abbott, TR COVID-19 IgM/IgG – Bio-Manguinhos e TR DPP® COVID-19 IgM/IgG Bio- Manguinhos, e um ELISA específico contra o SARS-CoV-2. A amostra foi composta por 580 soros de indivíduos testados no campo com o TR Abbott e no laboratório foram realizados os demais TRs e o ELISA. Dados sociodemográficos e comportamentais dos indivíduos relacionados à exposição ao SARS-CoV-2 foram obtidos em campo e analisados em relação à positividade dos testes avaliados. Para a análise da concordância dos resultados dos testes avaliados foi utilizado o Teste de Concordância Kappa Simples. Para a análise da diferença de desempenho foi utilizado o Teste de McNemar. Para a análise de associação entre resultado positivo nos testes avaliados em relação à exposição ao risco de infecção pelo SARS-CoV-2 e as medidas de prevenção a esta, foi calculado o odds ratio.

Resultados: Em relação a detecção de IgM, o TR Bio-Manguinhos foi o TR que apresentou maior positividade (40,9%). Quanto ao IgG, o ELISA teve a melhor detecção (52,9%), seguido do TR Abbott (47,8%). Dentre as análises de concordância de resultados dos três TRs avaliados para detecção de IgM, todos apresentaram concordância ruim ou fraca. Em relação aos testes de detecção de IgG, o TR Abbott e o TR Bio-Manguinhos apresentaram concordância moderada. Havendo uma melhor concordância entre os TRs e o ELISA, pelo aumento da especificidade do segundo método. Ao correlacionar o tempo de apresentação dos sintomas ao período de realização dos testes, quando houve um intervalo entre 1 a 2 meses, o TR Bio- Manguinhos teve o maior percentual de detecção (50%) de anticorpos IgM e o TR Abbott (78%) de anticorpos IgG. Pela ausência de um padrão-ouro, a interpretação dos dados obtidos nesse estudo se baseia em inferência através dos métodos estatísticos utilizados.

Palavras-Chave: COVID-19; Diagnóstico sorológico; SARS-CoV-2; testes rápidos.

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Autoria: Raquel Lima de Souza
Orientação: Guilherme de Sousa Ribeiro
Título da tese: “MONITORAMENTO AMBIENTAL E ENTOMOLÓGICO EM FRAGMENTO DE MATA ATLÂNTICA E EM UMA FAVELA NA ÁREA URBANA DE SALVADOR, BRASIL”
Programa: Pós-Graduação em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa
Data de defesa: 13/05/2022
Horário: 08h30
Local: Sala virtual do Zoom

RESUMO

INTRODUÇÃO: No Brasil, os vírus da dengue (DENV), Zika (ZIKV) e chikungunya (CHIKV) co-circulam desde 2015 e, entre 2016 e 2018, o país enfrentou os piores surtos da Febre Amarela Silvestre (FAS) desde a década de 1940. Estudos ambientais e entomológicos com uso de dados primários podem ajudar na identificação de características ambientais que contribuem para proliferação de vetores de arboviroses. Neste estudo, realizamos um extenso monitoramento ambiental e entomológico em um fragmento de Mata Atlântica e em uma favela em uma área urbana de Salvador. OBJETIVO: Inventariar a fauna de Culicídeos em um fragmento urbano de Mata Atlântica, e investigar o papel dos diferentes ecossistemas desse fragmento em abrigar mosquitos de importância para a saúde pública. Investigar se fatores socioambientais estão associados com a presença do Aedes aegypti em ambiente de favela, e identificar hotspots desse vetor através do uso de diferentes índices entomológicos. MÉTODOS: Entre maio e agosto de 2018, mosquitos adultos foram coletados usando o método de atração humana e armadilhas luminosas do tipo CDC (solo e copa) no fragmento de mata existente no Parque da Cidade. 30 pontos foram amostrados: 8 em áreas de restinga e 22 em floresta ombrófila densa. Entre setembro de 2019 a abril de 2021, realizamos quatro ciclos de coleta na área pública e em 149 domicílios (amostra inicial), em uma área de Pau da Lima. As inspeções consistiram em caracterização de criadouros; coleta de imaturos, aspiração de mosquitos adultos, e instalação de ovitrampas. RT-PCR para DENV, ZIKV e CHIKV, foi realizado em pools de espécimes fêmeas de Ae. aegypti capturados na comunidade. RESULTADOS: No Parque da Cidade, coletamos um total de 11.914 mosquitos. As espécies mais abundantes capturadas por CDC foram Culex quinquefasciatus, Limatus spp. e Wyeomyia spp., enquanto por atração humana foram Cx. quinquefasciatus, Wy. spp. e Ae. albopictus. A diversidade de mosquitos foi maior em áreas de restinga comparada com áreas de floresta ombrófila densa. Em Pau da Lima, identificamos 316 e 186 potenciais criadouros nas áreas privada e pública, respectivamente. Destes, 18 (5,7%) e 7 (3,7%) com Ae. aegypti imaturos, respectivamente. Criadouros sem cobertura, cercados por vegetação e contendo matéria orgânica na água foram significativamente associados à presença do Ae. aegypti imaturo, assim como os domicílios que possuíam reservatórios de água. Não detectamos hotspots do Ae. aegypti através do uso de índices entomológicos baseados em imaturos, ovos ou adultos. Nenhum dos pools testados foi positivo. CONCLUSÕES: Dada a alta probabilidade de encontro entre mosquitos e humanos em fragmentos urbanos de vegetação, justificam-se levantamentos entomológicos periódicos para determinar o risco de transmissão de arbovírus nesses ambientes. Em relação ao ambiente de favela, melhorar o saneamento básico por meio do abastecimento regular de água, drenagem e manejo adequado de resíduos sólidos pode reduzir oportunidades para proliferação do Ae. aegypti.

Palavras-chaves: Arboviroses, Culicidae, Aedes aegypti, Levantamento entomológico, Índices de infestação.

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Autoria: Paulo Sérgio de Morais da Silveira Mattos
Orientação: Bruno de Bezerril Andrade
Título da tese: “Dinâmica entre os linfócitos T CD4+ e as distintas apresentações clínicas da tuberculose”
Programa: Pós-Graduação em Patologia Humana
Data de defesa: 29/04/2022
Horário: 09h00
Local: Sala virtual do Zoom

RESUMO

INTRODUÇÃO: O diagnóstico da tuberculose (TB) é realizado através da detecção do M. tuberculosis (MTB) em testes microbiológicos, como baciloscopia e cultura e ensaios de biologia molecular. A intepretação desses exames é limitada, pois não trazem informações sobre a repercussão sistêmica, celular, inflamatória e apresentam baixa sensibilidade em indivíduos paucibacilar. OBJETIVO: Avaliar a ativação celular e as alterações fenotípicas em linfócitos T CD4+ em indivíduos com tuberculose, na presença ou não do HIV. MÉTODOS: Inicialmente, em uma coorte do Brasil, validamos a utilização de marcadores de ativação celular CD38, HLADR e/ou Ki67 em células TCD4+ específicas para MTB em discriminar tuberculose Pulmonar (TBP), Tuberculose extrapulmonar (TBEP) e tuberculose latente (ILTB). Testamos ainda o efeito da coinfecção pelo HIV no desempenho do diagnóstico. Juntou-se a esta tese, outro manuscrito abrangendo pacientes do sul da Índia com TB-HIV antes e após o início da terapia antiretroviral (TARV), determinando as alterações fenotípicas nas células T durante a síndrome inflamatória de reconstituição imune (SIRI) e sua relação com a inflamação sistêmica. Neste estudo, analisamos subpopulações de linfócitos T CD4 e biomarcadores no sangue periférico. RESULTADOS: Os pacientes com TBEP e TBP apresentaram uma maior frequência de células T CD4+ IFN-γ + expressando CD38, HLADR em comparação com ILTB. Além disso, as frequências de células HLADR+ ou Ki67+ distinguiram com precisão TBEP do TBP. A infecção pelo HIV não afetou a capacidade desses marcadores de distinguir tuberculose ativa de ILTB ou TBEP de TBP. No segundo estudo, a frequência de células T CD4 naive (CD27+CD45RO− ), bem como de memória efetora (CD27−CD45RO+) distinguiram os indivíduos que desenvolveram a síndrome inflamatória de reconstituição dos que não apresentaram, na 2°-6° semana após o início da TARV. Análises posteriores revelaram que o TARV reconstituiu diferentes quantidades de subconjuntos de linfócitos T CD4+ com expansão preferencial de células CXCR3+ CCR6− em pacientes com TB-SIRI. Além disso, houve uma expansão e restauração funcional de linfócitos T CD4+ CXCR3−CCR6+ expressando marcadores de memória central (CD27+CD45RO+) e citocinas correspondentes, com redução nas células CXCR3−CCR6+ após TARV apenas naqueles que desenvolveram TB-SIRI. CONCLUSÃO: Os marcadores de ativação celular em células T CD4+ específicas para MTB distinguiram TB ativa de ILTB e TBEP da TBP, independentemente do status de infecção pelo HIV. Os subconjuntos de células T CD4+ estão fortemente associadas com SIRI. Palavras-chave: Tuberculose, Células T CD4+ , HIV, biomarcadores.

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