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Estudante: Dahara Keyse Carvalho Silva
Orientação: Milena Botelho Pereira Soares
Título da tese: Avaliação da atividade imunomoduladora da fisalina F em células humanas e de camundongos
Programa: Pós-Graduação em Patologia Humana e Experimental
Data de defesa: 30/01/2025
Horário: 09h00
Local: Sala Virtual do Zoom
ID da reunião: 856 3388 8298
Senha: defesa
Resumo
Distúrbios no sistema imune são responsáveis pelo desenvolvimento de diversas doenças. Os medicamentos utilizados no tratamento dessas condições apresentam efeitos adversos graves, e por isso, há a necessidade de novos fármacos. Dentro desse contexto, as fisalinas possuem diversas atividades farmacológicas já descritas em literatura, sendo a fisalina F um importante composto com atividade imunomoduladora. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo investigar os efeitos imunomoduladores da fisalina F em esplenócitos de camundongo BALB/c e em células mononucleares do sangue periférico (PBMC) humanas. Inicialmente, foi realizado o ensaio de citotoxicidade em esplenócitos de camundongos BALB/c e PBMC. Posteriormente, foi avaliado o efeito do tratamento na linfoproliferação ativada por mitógeno por marcação com CFSE ou Celltiter Glo® e o efeito do composto na produção de mediadores inflamatórios, através do ELISA ou ELISPOT. A interferência da fisalina F no ciclo celular e no padrão de morte celular foram avaliados por citometria de fluxo. Investigou-se a terapia combinada da fisalina F com dexametasona utilizando Celltiter Glo®. Para investigação dos possíveis mecanismos de ação, avaliou-se o efeito do composto na atividade da calcineurina, a partir do kit de ensaio de atividade celular de calcineurina. O efeito in vivo foi avaliado em modelo de hipersensibilidade tardia. A interferência da molécula na expressão gênica foi avaliada por RT-PCR ou PCRarray. Em adição, foi avaliado o docking molecular entre a fisalina F com a calcineurina. A fisalina F, nas concentrações testadas (0,5, 1 e 2 µM), não apresentou citotoxicidade em esplenócitos de camundongos BALB/c e PBMC humanas. Após o tratamento com a fisalina F, houve inibição da linfoproliferação, apresentando ação sinérgica com a dexametasona. O tratamento com a fisalina F reduziu os mediadores inflamatórios IL-2, IFN-γ, IL-10, IL-4 e IL-13 e diminuiu células produtoras de IFNγ. O tratamento também induziu parada na fase G1 do ciclo celular e morte celular por apoptose. A fisalina F reduziu a atividade da calcineurina, além de reduzir o edema de pata em modelo de hipersensibilidade tardia. O composto modulou genes importantes da via do NFAT, como calcineurina, calmodulina e NFAT1. Os resultados demonstram uma potente atividade imunossupressora da fisalina F. Palavras-chaves: fisalina F; imumomodulação; linfócitos.
