Autoria: Girlaine Café Santos
Orientação: Milena Botelho Pereira Soares
Título da tese: “Potencial pró-angiogênico de células-tronco mesenquimais geneticamente modificadas para superexpressar o fator inibidor de leucemia (LIP)”.
Programa: Pós-Graduação em Patologia Humana-UFBA /FIOCRUZ
Defesa: 03/08/2020
Horário: 14:00 
Local: Sala Virtual do Zoom

RESUMO

INTRODUÇÃO: A angiogênese é o processo de formação de vasos sanguíneos em tecidos adultos e a sua compreensão pode ajudar no desenvolvimento de terapias para doenças isquêmicas. As células-tronco mesenquimais (CTMs) são células com capacidade de autorrenovação, diferenciação e secreção de moléculas que exercem múltiplos efeitos biológicos, como regeneração tecidual, redução da inflamação e neovascularização, caracterizando uma importante ferramenta da medicina regenerativa. O potencial terapêutico das CTMs pode ser aumentado por modificação genética para superexpressão de citocinas e fatores de crescimento. A hipótese desse estudo considerou que a superexpressão do Fator Inibidor da Leucemia (LIF) em CTMs de camundongo aumenta o seu potencial pró-angiogênico.

OBJETIVOS: O objetivo desse estudo foi gerar uma linhagem de células-tronco mesenquimais geneticamente modificadas para superexpressar LIF (CTM_LIF) e avaliar o seu potencial angiogênico em modelos in vitro e in vivo.

METODOS: As CTMs derivadas da medula óssea de camundongo foram transduzidas usando um sistema lentiviral de segunda geração para expressar LIF humano. A expressão de LIF foi confirmada por RT-qPCR e por ELISA. A caracterização das células geradas foi realizada pelo ensaio de diferenciação em três linhagens e o imunofenótipo foi avaliado por citometria de fluxo. A atividade imunossupressora de CTM_LIF foi confirmada usando ensaio de linfoproliferação. A análise da expressão gênica dos principais marcadores de angiogênese e celulares perivasculares foi realizada por RT-qPCR e imunofluorescência. Para avaliar os efeitos de CTM_LIF em células endoteliais obtidas a partir da veia umbilical (HUVECs), foi realizado o ensaio de cicatrização de feridas. A capacidade de CTM_LIF de formar brotamento de microvasos in vitro foi investigada em culturas de anel aórtico. Finalmente, foi realizado um experimento para demonstrar a formação de novos vasos sanguíneos in vivo com angiorreator de Matrigel.

RESULTADOS: Após a transdução, CTM_LIF apresentou aumento de expressão e secreção de LIF, indicando o sucesso da modificação genética. A análise por citometria de fluxo e o ensaio de diferenciação de três linhagens mostraram que CTM_LIF manteve o imunofenótipo e a multipotência característicos de CTM. A análise de expressão gênica demonstrou regulação positiva dos genes que codificam fatores estratégicos no processo de neovascularização, como angiogenina, IL-8, Mcp-1 e Vegf, e para os marcadores celulares perivasculares ɑSma, Col4a1, Sm22 e Ng2. No ensaio de cicatrização de feridas, o meio condicionado de CTM_LIF promoveu um aumento significativo na migração celular em comparação com o meio condicionado de CTM controle. O ensaio de brotamento em culturas de anel aórtico demonstrou que CTM_LIF favoreceu surgimento e alongamento de microvasos no tecido. O ensaio com angiorreator mostrou que o CTM_LIF foi mais potente na promoção da vascularização tecidual in vivo do que as CTM de controle.

CONCLUSÃO: Em conclusão, a superexpressão de LIF é uma estratégia promissora para aumentar o potencial pró-angiogênico das CTM e cria precedentes para futuras investigações de suas aplicações no tratamento de doenças isquêmicas e reparo tecidual.]
PALAVRAS-CHAVE: Células-tronco mesenquimais, Modificação genética, LIF, Fatores pró-angiogênicos, Angiogênese.

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